10.4 PRUEBA DE PCR EN EL DIAGNOSTICO DE                ENFERMEDADES GENÉTICAS POR MICROORGANISMOS  (BACTERIAS, PROTOZOARIOS, ENTRE OTROS)

Las aplicaciones actuales de la biología molecular para el diagnóstico clínico son muy variadas:

Genética

• Diagnóstico prenatal
• Tipaje de HLA
• Reordenamientos genéticos
• Detección de esperma aneuploide
• Creación de mapas genéticos

 

Diagnóstico Microbiológico

·        Diagnóstico rápido de infecciones víricas

·        Detección de microorganismos en células infectadas/transformadas

·        Determinación de la relación génetica entre varios tipos de microorganismos similares

·        Correlacionar la presencia/expresión de agentes virales/infecciosos en tejidos

         neoplásicos.

·        Determinar la resistencia a los antibióticos de las bacterias.

·        Epidemiología de las infecciones

·        Detectar y cuantificar microorganismos difíciles de cultivar o para los que no existen

           reactivos serológicos.

·        Detectar regiones transformantes específicas en virus

 

 

Diagnóstico y clasificación de neoplasias y establecimiento de un pronóstico

·       Detectar reordenamientos de genes

·       Detectar reordenamientos en tumores humanos con anomalías consistentes cariotípicas

·       Detectar reordenamientos moleculares/anomalías de expresión genética en ausencia de alteraciones del cariotipo  

·        Estudio de la estructura/expresión de oncogenes

·        Detección de amplificación genética/resistencia a drogas

·        Diagnóstico de cell lineage en base a la expresión genética 

APLICACIONES PCR

La extraordinaria sensibilidad de la técnica de PCR, que permite detectar una copia viral en un millón de células es un arma de gran valor en la detección de infecciones HPV, especialmente en aquellas con un bajo número de copias víricas, como es el caso de la infección oculta. El problema mas importante de las técnicas de amplificación genómica es la contaminación de la reacción con ADNs extraños, en cualquiera de sus fases, produciendo resultados falsamente positivos. La adopción de medidas, como el uso de pipetas de desplazamiento vertical, de separación de especímenes y reactivos o de "primers" anticontaminación permiten la obtención de resultados fiables. Otra desventaja de la reacción de PCR es la no amplificación de genomas cuando no existen "primers" específicos, con la imposibilidad de detectar nuevos tipos de HPVs.   

La técnica PCR in situ adapta la tecnología habitual de la PCR a un corte histológico. Se puede utilizar un termociclador convencional con alguno "trucos" (3), o bien recurrir a un termociclador específico para PRC in situ .